Dil selil manbràn wouj Fluorescence tach kit

 

Non pwodwi	Chat. Non	Spec.
Dil selil manbràn wouj Fluorescence tach kit	G1705	100-1000 T

 

 

Dil, ke yo rele tou DilC18(3), 1,1`-Dioctadecyl-3,3,3`,3`-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, ak yon pwa molekilè nan 933.87, se yon klas lipofil, long chèn dialkyldicarbocyanine. koloran, koloran fliyoresan, souvan itilize nan etikèt la nan manbràn selilè ak lòt estrikti byolojik ki idrosolubl nan grès. Apre yo fin antre nan manbràn selilè a, Dil ka difize lateralman epi piti piti tach tout manbràn selilè.Dil fluoresans trè fèb anvan yo antre nan manbràn selilè a, epi entansite fluoresans la pral anpil amelyore lè li mare nan selil la, epi li ka emèt zoranj- fliyoresan wouj apre eksitasyon epi yo ka detekte pa filtè TRITC estanda. Longèdonn maksimòm eksitasyon Dil se 550 nm, ak longèdonn maksimòm emisyon an se 564 nm. Dapre karakteristik Dil, li ka tach selil k ap viv kòm byen ke selil fiks yo. Anplis de sa. Dil sondes jeneralman pa afekte viabilité de cellules, se konsa Avant ou inverse étiquettes cellules ou kèk sibstans (exosomes) ka sèvi kòm tracer détection.

Dil selil manbràn wouj Fluoresans tach twous la gen Dil sond fluoresans ak tanpon optimize tach, sa ki ka fè tach manbràn selilè pi vit, fliyoresans pi klere ak ki estab.

 

 

Bato ak glas sèk; magazen nan -20 degre nan fè nwa a, valab pou 6 mwa.

 

 

Nimewo Eleman	Eleman	G1704
G1705-1	Dil Cell Manbràn Wouj Fluoresan Sond	100μL
G1705-2	Tach tanpon	100mL
Manyèl		Yon kopi

 

 

1. Preparasyon nan solisyon travay Dil tach:

1.1. Melanje ak delye Dil Cell Manbràn Wouj Fluoresan Sond ak Tach Tanpon nan yon rapò 1:250 pou prepare Dil Staining Travay Solisyon (pare pou itilize); sonje ke rapò a dilution pwofonde Dil ka ajiste nan 1: 250-1: 500 selon sitiyasyon an espesifik yo nan lòd yo jwenn efè a tach pi bon.

 

2. tach nan selil sispansyon vivan

2.1. Santrifige selil yo sispann nan 500-1,000×g nan tanperati chanm pou 3-5 min, retire sipènatan selil la;

2.2. Ajoute kantite ki apwopriye nan solisyon travay Dil tach pou repoze selil yo nan yon dansite selil final nan 1-2×106 selil/mL.

2.3. Enkube a 37 degre nan fè nwa pou 5-20 min. Tan enkubasyon pi bon an varye pou diferan selil yo. Kòmanse ak 5 min epi optimize tan enkubasyon an baze sou rezilta final la tach.

2.4. Nan fen enkubasyon, santrifuje nan 500-1000 g pou 3-5 min nan tanperati chanm epi aspire solisyon an k ap travay tach Dil;

2.5. Selil yo te resuspend ak PBS pre-chofe oswa medyòm kilti selil nan 37 degre ak santrifuje nan 500-1000 g pou 3-5 min yo retire supernatant la;

2.6. Repete etap 2.5.

2.7. Detekte pa sikometri koule dirèkteman oswa pa mikwoskopi fluoresans apre yo fin transfere selil yo nan yon plak milti-byen, plat kilti selil oswa glise k ap grenpe selil. Dil gen yon maksimòm eksitasyon nan 550 nm ak yon maksimòm emisyon nan 564 nm.

 

3. Tach nan selil vivan aderan yo (6-byen plak kòm yon egzanp):

3.1. Grenn selil aderan nan 6-plak byen nan yon sèten dansite.

3.2. Retire mwayen kilti a epi lave selil yo de fwa ak PBS (Rekòmande G4202). Ajoute 1 mL solisyon travay Dil tach (lòt plak byen gwosè, ajiste jan sa apwopriye pou asire ke lank la kouvri selil yo);

3.3. Enkube a 37 degre nan fè nwa pou 5-20min. Tan enkubasyon pi bon an varye pou diferan selil yo. Kòmanse ak 5 min epi optimize tan enkubasyon an baze sou rezilta final la tach.

3.4. Aspire solisyon travay tach manbràn selilè a epi lave selil yo 1-2 fwa ak PBS prechofe oswa mwayen selil.

3.5. Ajoute medyòm kilti selil pre-chofe oswa mwayen selil a 37 degre epi detekte selil pa mikwoskospi fluoresans. Dil gen yon maksimòm eksitasyon nan 550 nm ak yon maksimòm emisyon nan 564 nm.

 

4. Tach nan selil fiks aderan yo:

4.1. Pre-pwosesis echantiyon:

Pou selil yo: Retire mwayen selil la epi lave 1-2 fwa ak PBS. Ajoute 4% solisyon ranje paraformaldehyde (Rekòmande G1101) pou 10 min nan tanperati chanm. Retire solisyon ranje epi lave 2-3 fwa ak PBS;

4.2. Pèmeabilizasyon: Ajoute 0.1-0.5% Triton-100 (prepare ak PBS) ak pèmeti pou 10 min nan tanperati chanm. Retire solisyon pèmeabilizasyon epi lave 2-3 fwa ak PBS.

4.3. (Si ou vle, etikèt imunofluoresan) Enkube ak antikò dapre pwotokòl imunostaining oswa enkubasyon ak lòt koloran.

Remak: Solisyon bloke, diluan antikò, ak solisyon lave pou imunostaining pa ta dwe gen detèjan.

4.4. Ajoute yon kantite apwopriye nan solisyon travay Dil tach pou kouvri selil yo, enkubasyon nan 37 degre lwen limyè pou 5-20 min, epi aspire solisyon an travay tach Dil. Li rekòmande ke tan an tach dwe ajiste nan echantiyon selil espesifik la pou jwenn rezilta optimal tach;

4.5. Selil yo te lave 2-3 fwa ak PBS epi yo mete yo anba yon mikwoskòp fliyoresan pou obsèvasyon (selil yo bezwen kouvri ak kantite apwopriye PBS).Dil gen yon longèdonn eksitasyon maksimòm 550 nm ak yon longèdonn maksimòm emisyon 564 nm. .

 

5. Etikèt fliyoresan nan exosomes:

5.1. Resuspend presipitasyon exosome ak yon kantite apwopriye nan solisyon travay Dil tach.

5.2. Enkube a 37 degre pou 30 minit nan fè nwa a.

5.3. (si ou vle) Delye echantiyon an ak 10-pliye volim PBS.

5.4. Ekstrè exosomes ankò selon pwotokòl ekstraksyon anvan an pou retire koloran depase.

5.5. Kolekte presipitasyon exosomes epi resuspend nan PBS pou jwenn exosomes ki make Dil. Li ka itilize pou eksperyans ki vin apre, tankou absorption selilè.

 

 

1. Tout koloran fliyoresan gen pwoblèm trempe, tanpri pwoteje kont limyè pandan operasyon an pou ralanti fliyoresan trempe.

2. Akòz pwofonde a se lipofil, tanpri evite itilize reyaktif ki gen gliserin oswa lòt matyè òganik.

3. Si fikse nesesè, nou rekòmande pou ranje nan 4% paraformaldehyde. Lòt solisyon ranje ki pa apwopriye ap mennen nan background segondè fluoresans.

4. Yo ta dwe ajiste rapò pi gwo dilution ak tan enkubasyon pwofonde a selon sitiyasyon aktyèl la akòz sansiblite diferan ant selil yo ak egzijans eksperimantal.

5. Pou sekirite ak sante w, tanpri mete linèt sekirite, gan, oswa rad pwoteksyon.

 

Pou itilize rechèch sèlman!

 

 

Baj popilè: dil selil manbràn wouj fluoresans tach twous, Lachin dil selil manbràn wouj fluoresans tach twous manifaktirè, Swèd, faktori