ER-Tracker vèt

ER-Tracker vèt (Endoplasmic Reticulum Green Fluorescent Probe) se yon konbinezon de lank vèt fliyoresan BODIPY FL ak Glibenclamide. Gwoup la glibenclamide nan estrikti chimik li yo, orijinal yon dwòg tretman dyabèt tip II, mare nan reseptè a sulfonilurea nan chanèl potasyòm ATP-sansib sou retikul la andoplasmik, epi konsa yo ka selektivman lokalize nan retikul la andoplasmik epi itilize kòm yon retikul endoplasmik espesifik. sond fliyoresan pou etikèt retikul endoplasmik selil yo.ER tracker vèt gen bon espesifik, se trè selektif pou retikul endoplasmik selil k ap viv, raman tach mitokondri, epi li gen sitotoksisite ki ba. Pwofonde sa a ka pasyèlman kenbe karakteristik yo tach nan selil k ap viv apre tach ak fikse.

Bato ak glas sèk; Sere nan -20 degre lwen limyè pou 12 mwa.

1. Preparasyon solisyon travay tès:

1.1. Pwodui sa a se yon solisyon depo 1 mM ki chofe tounen nan tanperati chanm anvan eksperimantasyon ak santrifuje yon ti tan nan vitès ki ba pou asire ke reyaktif yo koule nan pati anba tib la;

1.2. Li dilye nan 0.25-1 μM solisyon k ap travay pou deteksyon retikul andoplasmik pa tanpon (Hanks, PBS, elatriye, Hanks rekòmande) oswa mwayen fondamantal (san serom);

2. Tach selil (pwotokòl sa a se pou selil aderan yo; santrifujasyon obligatwa pou echanj selil sispansyon)

2.1. Selil nòmal oswa trete yo lave 1-2 fwa ak tanpon pou 3-5 min chak fwa;

2.2. Ajoute solisyon travay tès retikul endoplasmik pre-chofe, ak enkubasyon nan yon enkibatè kilti selil nan 37 degre pou 20 min (tan an enkubasyon ka ajiste nan yon sèten mezi akòz diferan kalite selil ak eta);

2.3. Retire solisyon travay tès retikul andoplasmik la epi lave ak tanpon 2-3 fwa pou 3-5 min chak;

2.4. Yo obsève fliyoresans vèt (Ex=504 nm, Em=511 nm) anba yon mikwoskòp fliyoresan apre yo fin bloke fim nan dirèkteman oswa avèk yon Mwayen Mounting Anti-fade (rekòmande G1401);

3. Selil fikse (opsyonèl):

Remak: Apre tach, pwodui sa a ka fiks, men siyal fliyoresan an pral atenye apre fikse; li pa ka detache pou pwosesis, ak pèforasyon ap mennen nan disparisyon nan etikèt fliyoresan.

3.1. Selil trete yo tache ak lave yo ajoute nan fiksatif la (rekòmande G1101) epi yo fikse pou 5 min nan tanperati chanm;

3.2. Retire fixatif la epi lave ak tanpon 2-3 fwa pou 3-5 minit chak fwa;

3.3. Apre lave, selil yo ka imedyatman bloke, mikwoskopik egzamine oswa plis tache selon bezwen eksperimantal.

Remak

1. Akòz diferan kalite ak eta selil yo, konsantrasyon k ap travay nan lank lan, ak tan enkubasyon yo ka ajiste kòmsadwa.

2. Pwofonde a pa t 'kapab detache pou tretman apre tach, ak fliyoresans selil disparèt prèske nèt apre pèforasyon.

3. Pwopriyete famasi glibenclamid ka afekte sèten fonksyon retikul andoplasmik la; ekspresyon varyab nan reseptè sulfonilurea nan kèk selil espesyalize ka lakòz tou tach ki pa andoplasmik retikul espesifik.

4. Lè tach ak lave selil vivan yo, solisyon an k ap travay tès ak tanpon lave bezwen pre-chofe nan 37 degre. Tach ak lave yo akonpli pa enkubasyon nan yon enkibatè pou yo pa afekte mòfoloji selil yo pa eksitasyon diferans tanperati.

5. Yo nan lòd yo anpeche fluoresans trempe, tout pwosesis la tach bezwen yo dwe opere lwen limyè.

6. Melanj mèt sonde yo ta dwe estoke nan resipyan separe pou evite konjelasyon repete ak dekonjle. Pou evite fatra, solisyon an tach prepare jan sa nesesè, pare pou itilize.

7. Pou sante w ak sekirite w, tanpri mete rad laboratwa ak gan pandan operasyon an.

Pou itilize rechèch sèlman!

Baj popilè: er-tracker vèt, Lachin er-tracker vèt manifaktirè, Swèd, faktori