PEI 40K reyaktif transfèksyon

PEI 40K reyaktif transfèksyon (reyaktif transfè polietilenimin linearize) se yon polymère kasyonik ki chaje ak yon pwa molekilè 40,000 ki baze sou polietilènimin linearize, ki chaje pozitivman epi li ka efektivman mare asid nikleyik chaje negatif pou fòme yon konplèks ak yo epi prezante yo nan selil yo, epi li apwopriye pou transfè ADN plasmid nan selil yo. PEI 40K (linearize polyethyleneimine) reyaktif transfèksyon gen sitotoksisite ki ba, efikasite transfè segondè ak pri ki ba, ki fè li trè pri-efikas konpare ak reyaktif transfèksyon ki baze sou liposom. Li te valide ke reyaktif transfeksyon lineyè PEI 40K lajman itilize nan yon varyete liy selil ki gen ladan HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ 3T3, Sf9, HepG2, ak selil Hela, elatriye, ak efikasite transfeksyon kòm yon wo 80% ~ 90%. Konsantrasyon PEI 40K, eleman prensipal pwodwi sa a, se 1 mg/mL.

Bato ak glas mouye; Sere nan -20 degre, valab pou 6 mwa. Oswa magazen nan 4 degre, valab pou 3 mwa.

1. Preparasyon anvan transfè selil aderan yo (6-byen plak, tab referans pou lòt espesifikasyon):

A) Jou anvan transfèksyon, selil yo te apwopriye pou yo plante inifòm nan plak pò yo nan yon

dansite apwopriye pou konvèje a 70 - 85% lè transfè fòmèl;

B) Anvan transfèksyon, yo te retire medya selil prensipal yo epi lave 1-2 fwa ak PBS anvan yo ranplase 1.8 mL medyòm baz san serom oswa serom ki ba (anba 5%), oswa Opti-MEM; diferan selil te gen diferan depandans serom depann sou kalite selil espesifik;

C) Selil apped yo te mete nan enkibatè a epi yo te kòmanse preparasyon konplèks transfeksyon.

2. Selil sispansyon yo te prepare anvan transfèksyon:

A) Jou transfèksyon an, yo te santrifuje yon kantite selil ki apwopriye pou retire mwayen an

ak resuspend ak mwayen fondamantal san serom oswa serom ki ba (anba a 5%);

B) Selil sispansyon prepare yo te mete nan enkibatè a epi yo te kòmanse preparasyon an

konplèks transfection, ak rapò volim ant konplèks transfection ak mwayen te kapab

dwe fèt an referans a selil aderan pou ajisteman apwopriye.

3. Yo te prepare konplèks transfè:

A) Preparasyon likid A: 100 μL medyòm baz san serom ak 2 ug ADN plasmid, mouche ak

melanje;

B) Preparasyon likid B: 100 L medyòm baz san serom ak 6-8 μL PEI 40 K transfè

Reyaktif, mouche ak melanje;

C) Solisyon B te ajoute nan likid A, dousman kònen ak melanje, ak enkubasyon nan tanperati chanm pou

15 min pou fòme yon konplèks transfè ADN-PEI.

4. Selil transfekte yo:

A) Ajoute konplèks transfection jwenn nan etap anvan an nan plak la twou deja chanje pa

travèse oswa antoure solisyon an;

B) Souke plak la "8" oswa yon lòt fason yo dwe konplètman melanje ak enkubatè nan yon enkibatè 37 degre, 5% CO2;

C) Konplèks transfè ADN-PEI ak selil pou 4 - 6 èdtan te montre pi bon efikasite transfèksyon,

ekstansyon apwopriye oswa enkubasyon lannwit lan ak pi bon efikasite transfèksyon.

1. Tanpri itilize selil ki an sante nan bon kondisyon ak selil refè yo rekòmande pou yo pase omwen 2 fwa anvan transfèksyon.

2. Tanpri itilize yon ADN plasmid ki gen bon jan kalite, san endotoksin.

3. Pou premye itilizasyon, li rekòmande ke pwodwi a dwe dispanse pou evite konjelasyon repete ak dekonjle.

4. Konsantrasyon segondè nan serom nan transfèksyon, osi byen ke itilizasyon antibyotik, ka afekte estati selilè osi byen ke efikasite transfèksyon.

5. Diferan tolerans selilè, sansiblite, longè tan enkubasyon transfèksyon, ak rapò itilizasyon PEI / ADN yo te ajiste jan sa apwopriye.

6. Tanpri mete kostim eksperimantal ak gan jetab lè operasyon.

Orè: Itilizasyon transfeksyon nan diferan resipyan kilti selil (pou referans sèlman)

Pou itilize rechèch sèlman!

Baj popilè: pei 40k transfection réactif, Lachin pei 40k transfection réactif fabricants, ke founisè, faktori