Twous Deteksyon Mycoplasma (PCR)

Kontaminasyon Mycoplasma pral lakòz efè negatif sou tout aspè nan selil yo, e li te vin tounen yon pwoblèm trè valè nan kilti selil. Se poutèt sa, li trè nesesè yo regilyèman detekte kontaminasyon mycoplasma. Twous deteksyon mycoplasma sa a itilize metòd PCR pou detekte spesifikman kontaminasyon mycoplasma nan divès kalite materyèl byolojik selil kiltive (tankou kilti selil, sekresyon bèt eksperimantal, serom bèt, elatriye). Primè melanje yo itilize nan twous la se primè espesifik ki fèt pou rejyon konsève nan sekans 16S rRNA Mycoplasma. Anplifikasyon PCR espesifik nan ADN Mycoplasma ka ranpli nan yon èdtan ak matche Mycoplasma PCR Mix (2 ×) lè l sèvi avèk solisyon kilti selil kòm modèl PCR la. Twous sa a gen gwo sansiblite epi li ka detekte 20 kopi mikoplasm.

Bato ak glas mouye; Sere nan -20 degre, valab pou 12 mwa.

1. Prepare echantiyon an: Yo te pran bon jan kantite sipènatant kilti selil yo dwe teste nan yon tib PCR pwòp. Tib PCR sa yo te trete chalè a 95 degre pou 5 min nan enstriman PCR, epi yo itilize li kòm yon modèl. Echantiyon serom yo ka dilye ak Mycoplasma Free Water, epi yo te mete echantiyon ki apwopriye yo nan yon tib PCR pwòp. Tib PCR sa yo te trete chalè a 95 degre pou 5 min nan enstriman PCR, epi yo itilize li kòm yon modèl. ;

2. Prepare reyaksyon PCR yo: Kontwòl negatif (ranplase 1 μL echantiyon ak menm kantite dlo Mycoplasma gratis) ak kontwòl pozitif (ajoute 0.5 μL Kontwòl pozitif nan echantiyon 1 μL kòm Modèl) chak eksperyans. Mete mask ak gan jetab pandan eksperyans la, epi opere avèk prekosyon pou anpeche move entwodiksyon kontaminasyon mikoplasm ekzojèn;

3. Mete kanpe pwogram PCR la:

4. Elektwoforèz jèl: Pran 10 μL pwodwi PCR epi sèvi ak 1% jèl agarose pou deteksyon elektwoforèz.

5. Analize rezilta yo: Nan chak eksperyans, kontaminasyon Mycoplasma echantiyon yo genyen nan konpare ak rezilta kontwòl negatif ak kontwòl pozitif. Gwosè gwoup la pozitif te apeprè 500 bp. Si gen bann nan rezilta tès kontwòl negatif yo, li gen anpil chans pou kontaminasyon nan sistèm PCR la, epi li sijere pou konfime rezilta yo ankò. Si sa nesesè, pwodwi PCR yo kapab tou sekans regilyèman pou idantifye espès mikoplasm espesifik yo.

1. Twous sa a ka detekte M. orale,M. arginini, M. bovis,M. fermentan, M. gallisepticum, M. hominis, M. pirum, Ureaplasma spp, M. hyorhinis, M. nemoni, A. laidlawii ak lòt omwen 11 kalite kontaminasyon mycoplasma.

2. Tout reyaktif yo ta dwe dekonjle ak melanje byen sou glas anvan yo itilize, epi estoke nan -20 degre apre yo fin itilize.

3. Yo dwe mete kontwòl negatif ak kontwòl pozitif pou chak eksperyans, epi gwoup eksperimantal la rekòmande pou mete echantiyon modèl gradyan.

4. Yo dwe mete mask pandan operasyon an, epi yo dwe respekte estanda operasyon PCR yo pou anpeche entwodiksyon polisyon ekzojèn afekte rezilta eksperimantal yo.

5. Pou asire fyab ak estabilite eksperyans selil yo, li rekòmande pou detekte kontaminasyon mycoplasma regilyèman.

6. Pou sekirite ak sante w, tanpri mete rad laboratwa ak gan jetab.

Pou itilize rechèch sèlman!

Baj popilè: Twous deteksyon mycoplasma (pcr), Lachin twous deteksyon mycoplasma (pcr) manifaktirè, Swèd, faktori