Dekri teren

Karakteristik teknik

Entwodiksyon pwodwi

Non pwodwi	Chat. Non.	Esp.
2×SYBR Green qPCR Master Mix (Okenn ROX)	G3320-01	1 ml
	G3320-05	5 × 1 mL
	G3320-15	15 × 1 mL

Deskripsyon Product / Entwodiksyon

2 × SYBR Green qPCR Master Mix (Okenn ROX) se yon espesyal 2 × premix pou reyaksyon qPCR lè l sèvi avèk SYBR Green I chimerik metòd fluoresans, ki gen tout konpozan qPCR eksepte primè ak modèl ADN, ki ka diminye etap operasyon yo, diminye tan an nan. ajoute echantiyon, epi redwi chans pou kontaminasyon. Eleman debaz la se jenetikman Enjenieri Taq ADN Polymerase cho-start, ki efektivman fèmen aktivite ADN polymerase ak anpeche anplifikasyon ki pa espesifik nan tanperati ki ba avèk efikasite.

konbine antikò monoklonal ak Taq DNA Polymerase, ak anpil avantaj tankou espesifik ak segondè sansiblite, epi li se makonnen ak yon tanpon reyaksyon optimize pou qPCR. Li trè apwopriye pou espesifik ak segondè reyaksyon qPCR sansiblite. Pwodui sa a se yon 2 × reyaktif premixed ki gen konsantrasyon optimal nan SYBR Green I pou reyaksyon qPCR, ki ka jwenn yon koub estanda bon nan yon zòn quantification lajè, quantification egzat nan jèn sib, bon repwodibilite ak gwo konfyans.

Kondisyon Depo ak Shipping

Bato ak glas mouye. Sere nan -20 degre san limyè, valab pou 12 mwa. Evite sik friz-degel. Apre dekonjle, li ka estab nan estoke nan 4 degre pou yon mwa san limyè.

Kontni pwodwi

Eleman	G3320-01	G3320-05	G3320-15
2×SYBR Green qPCR Master Mix (Okenn ROX)	1 ml	5 × 1 mL	15 × 1 mL
Manyèl	Yon kopi

Pwotokòl tès / Pwosedi

Anvan yo kòmanse

1. Aparèy anplifikasyon PCR an tan reyèl;

2. Tib reyaksyon espesyal oswa plak reyaksyon pou eksperyans;

3. Jadendanfan PCR (referans prensip konsepsyon primè);

4. Micropipette ak otoklav-konsèy;

Pwosedi yo

1. Rekòmande sistèm reyaksyon qPCR la:

Eleman	20 μL rxn	50 μL rxn	Final Konsantrasyon
2×SYBR Green qPCR Master Mix (Okenn ROX)	10 μL	25 μL	1×
Pi devan (10 μM) a	0.4 μL	1 μL	0.2 μM
Ranvèse Primer (10 μM)a	0.4 μL	1 μL	0.2 μM
Modèlb	Varyab	Varyab	jan sa nesesè
Dlo san nukleaz	Ajoute 20 μL	Ajoute 50 μL

a. Anjeneral, yo ka jwenn yon bon efè anplifikasyon ak konsantrasyon final {{0}}.2 μM. Lè pèfòmans reyaksyon an pòv, konsantrasyon Jadendanfan an ka ajiste nan seri 0.2-1.0 μM.

b. Kantite modèl ajoute varye selon kantite kopi jèn sib la, epi dilution gradyan etidye kantite lajan ki apwopriye a nan adisyon modèl. Pi bon kantite lajan adisyon modèl ADN nan sistèm reyaksyon 20 μL la te mwens pase 100 ng. Lè cDNA (solisyon reyaksyon RT) reyaksyon RT-PCR te itilize kòm modèl, kantite lajan adisyon pa ta dwe depase 10% volim qPCR final la.

2. Pwogram reyaksyon PCR (ka ajiste kòmsadwa dapre enstriman an)

A. Pwosesis de etap *					B. Pwosesis twa etap*
Etap	Etap	Sik	Tanperati	Tan	Etap	Etap	Sik	Tanperati	Tan
Etap 1	Predejenerasyon	1	95 degre	30 sec	Etap 1	Predejenerasyon	1	95 degre	30 sec
Etap 2	Dejenerasyon	40	95 degre	15 sec	Etap 2	Dejenerasyon	40	95 degre	15 sec
	Recuit-ektansyon		60 degre	30 seka		Recuit		55-65 degre	10 sec
	Recuit-ektansyon		60 degre	30 seka		Ekstansyon		72 degre	30 seka
Etap 3	Koub k ap fonn	1	Anviwònman default enstriman		Etap 3	Koub k ap fonn	1	Anviwònman default enstriman

*: Si espesifik anplifikasyon bezwen amelyore, pwosedi de-etap oswa tanperati rkwit ka itilize; Pou amelyore efikasite anplifikasyon, yo ka itilize yon pwosedi twa etap oswa tan ekstansyon.

a: Pou koleksyon siyal fluoresans, tanpri mete pwosedi eksperimantal la dapre manyèl enstriksyon enstriman an.

Remak

1. Melanje dousman tèt anba anvan ou itilize. Pa toubiyon ak souke pou evite bul. Reyaktif yo melanje byen anvan yo itilize.

2. Yo ta dwe mete reyaktif yo sou glas lè w ap prepare solisyon reyaksyon.

3. Pwodwi a gen lank fluorescent SYBR Green, kidonk fò limyè yo ta dwe evite lè w ap prepare solisyon reyaksyon PCR.

4. Tanpri itilize nouvo konsèy jetab pou preparasyon ak anbalaj solisyon reyaksyon an pou evite kontaminasyon ant echantiyon yo.

5. Evite repete friz-dekonjle Master Mix epi eseye sèvi ak li nan yon mwa apre dekonjle.

Enstriman konpatib

Mak machin PCR	G3320 (Okenn ROX)	G3321 (Ba ROX)	G3322 (Segondè ROX)
ABI Thermo lavi	PikoRealTM Cycler	7500/7500 vit, ViiA 7™ QuantStudio™ seri	5700/7000/7300/7700/7900/ 7900HT/7900 HT Fast,StepOne™,StepOne Plus™
Estratagene		Mx3000P% c2% ae/3005P% e2��/4000% e2�% a2
Bio-Rad	Tout seri
Eppendorf	Realplex 2s, Mastercycler®ep realplex
IIIumina	Ekolojik QPCR
Sefeid	SmartCycler®
Qiagen Corbett	Rotor-Gene® seri
woule	LightCycler™ seri
Takara	Thermal Cycler Dice seri
Analytikjena	qTOWER seri
KTOWER	Seri LineGene

Prensip konsepsyon Primer

1. Yo rekòmande longè pwodwi anplifikasyon an ant 80-300 bp;

2. Longè Primer: 18-25 bp;

3. Kontni baz G+C nan primè yo ta dwe ant 40% -60%;

4. Diferans valè Tm ant primè avanse ak primè ranvèse se mwens pase 2 degre, ak valè Tm ant 58-62 degre se pi bon an;

5. Owaza distribisyon baz;

6. Premye yo te pi bon pa genyen sekans pwòp tèt ou konplemantè, otreman yo pral fòme yon estrikti epengl segondè;

7. Pa ta dwe gen plis pase 4 baz konplemantè oswa omològ ant de primè, otreman dimè primè pral fòme, espesyalman sipèpoze konplemantè nan fen 3';

8. Sigjere baz tèminal 3' Jadendanfan an se G oswa C;

9. Yo pa jwenn okenn lòt pwodwi ki pa espesifik nan rezilta konparezon NCBI.

Pwoblèm-Fiziyad

Pwoblèm	Ka posib	Solisyon
Nan fen reyaksyon an, pa gen okenn koub anplifikasyon parèt oswa valè CT parèt twò ta	Konsantrasyon modèl twò ba	Diminye kantite dilusyon modèl pou repete eksperyans lan, kòmanse ak konsantrasyon ki pi wo a si konsantrasyon echantiyon an pa konnen.
	Degradasyon nan primè	Repare modèl la epi repete eksperyans la.
	Inibitè PCR prezan nan melanj reyaksyon an.	Anjeneral modèl report, ogmante dilution modèl oswa re-prepare modèl ak pite segondè repete eksperyans la.
	Degradasyon posib nan primè	Jadendanfan ki pa te itilize pou yon peryòd tan ki long ta dwe premye teste pou entegrite pa elektwoforèz PAGE pou eskli degradasyon yo.
	Ba efikasite anplifikasyon	Ogmante konsantrasyon primè a, eseye yon pwogram anplifikasyon twa etap, oswa redesign primè yo.
	Pwodwi anplifikasyon twò lontan	Longè pwodwi anplifikasyon te kontwole nan 80-300 bp.
Siyal anplifikasyon nan kontwòl ki pa modèl	Kontaminasyon sistèm reyaksyon	· Premye chanje dlo kontwòl vid la, si menm bagay la toujou rive, kontinye chanje primè yo, konsèy, tib PCR oswa pèmèt yon nouvo Master Mix; Se sistèm reyaksyon an prepare nan yon ban ultra-pwòp pou minimize kontaminasyon aerosol.
Siyal anplifikasyon nan kontwòl ki pa modèl	Anplifikasyon ki pa espesifik tankou dimè primè	Anjeneral, li nòmal pou pwodwi anplifikasyon parèt nan kontwòl vid la apre 35 sik, ki ta dwe analize ansanm ak koub la k ap fonn; redesign primè yo, ajiste konsantrasyon primè a oswa optimize pwosedi reyaksyon PCR la.
Koub k ap fonn lan gen plizyè pik	Premye konsepsyon se pa pi bon	Nouvo primè yo te reamenaje dapre prensip konsepsyon primè yo.
	Konsantrasyon Primer la twò wo	Diminye konsantrasyon primè yon fason ki apwopriye
	Kontaminasyon jenomik nan modèl cDNA	Solisyon RNA ekstrè a dijere lè l sèvi avèk anzim ADN, tankou dsDNase, pou retire kontaminasyon genomik, oswa pou konsepsyon primè transintron.
Pòv repwodiksyon eksperyans yo	Erè a nan ajoute echantiyon se gwo	Itilize nan pipèt egzat, ak bon jan kalite tèt aspirasyon pipèt egzat; Segondè modèl dilution, ajoute modèl volim gwo pou diminye erè echantiyon; Volim reyaksyon qPCR te elaji
	Konsantrasyon modèl la twò ba	Diminye fwa dilution modèl la pou repete eksperyans lan.
	Devyasyon tanperati nan diferan kote nan enstriman qPCR la	Kalite enstriman qPCR la regilyèman
Koub anplifikasyon an pa lis	Siyal fliyoresans twò fèb, pwodui apre koreksyon sistèm lan	Asire ke koloran yo premelanje nan Master Mix la pa degrade; Ranplase siyal fliyoresan pou kolekte pi bon consommables qPCR
Koub anplifikasyon kase oswa glise	Konsantrasyon modèl la te pi wo epi valè pwen debaz la te pi gran pase valè CT	Pwen final debaz la (Valè Ct -3) te redwi epi done yo te re-analize
Koub anplifikasyon nan Wells endividyèl toudenkou tonbe sevè	Gen bul nan tib reyaksyon an	Asire ke MIX konplètman fonn, epi pa toubiyon ak osile respire; Apre yo fin ajoute echantiyon an, bul yo retire pa santrifujasyon ak elastik limyè. Tan pre-denaturasyon an te pwolonje a 10 minit pou retire bul yo

Pou itilize rechèch sèlman!

Baj popilè: 2 × sybr green qpcr mèt melanj (okenn rox), Lachin 2 × sybr green qpcr mèt melanj (okenn rox) manifaktirè, founisè, faktori

2×SYBR Green QPCR Master Mix (Okenn ROX)